Obraz przedstawia grupę kilkunastu żołnierzy, tytułowych kozaków dońskich konno. Skierowani są ¾ w lewo. Ubrani w długie kaftany, na piersiach ładownice, na głowach wysokie futrzane czapy. Stoją spokojnie trzymając za lejce swoje konie. Po lewej stronie dowódca na białym koniu, za nim chorąży z powiewającą na wietrze żółto-białą chorągwią, na której widnieje prawosławny krzyż oraz tuż pod nim półksiężyc.